Plásmido Doble Nickase (m) ATP11B: sc-429296-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)ATP11B consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ATP11B (m) y el plásmido de doble nickasa ATP11B (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Atp11b. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) ATP11B | sc-429296-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) ATP11B | sc-429296-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Atp11b codifica ATP11B, una flippasa de fosfolípidos P4-ATPasa que ayuda a mantener la asimetría lipídica de la membrana al translocar aminofosfolípidos a través de las bicapas dentro del sistema endomembranoso. Al modular la gemación de vesículas, la curvatura de la membrana y el tráfico a través de la red trans-Golgi y los compartimentos endosomales, ATP11B favorece la clasificación de la carga, el reciclaje de receptores y la homeostasis de los orgánulos. La alteración del transporte lipídico y de las rutas vesiculares reguladas por las P4-ATPasas puede modificar la polaridad celular, las respuestas al estrés y las salidas de señalización vinculadas a la inflamación y a la disfunción de membranas asociada a la neurodegeneración. En modelos de ratón, la perturbación de Atp11b ofrece un punto de entrada manejable para estudiar cómo la remodelación de fosfolípidos se integra con el transporte intracelular y la proteostasis.
ATP11B El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Atp11b en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Atp11b. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Atp11b. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Atp11b alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.