Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ataxin-1: sc-403309-ACT

ATXN1 code l’ataxine-1, une protéine majoritairement nucléaire qui participe à la régulation transcriptionnelle et à des processus liés à l’ARN via des interactions avec la chromatine et des partenaires de liaison à l’ARN. L’ataxine-1 contribue aux programmes d’expression génique neuronaux et du développement, et est associée à des voies de maintien de l’homéostasie protéique, notamment le renouvellement dépendant de l’ubiquitine et la compartimentation subnucléaire. Une altération du dosage ou de la fonction d’ATXN1 peut perturber les réseaux transcriptionnels et les réponses cellulaires au stress, et ce gène est largement étudié dans le contexte de la neurodégénérescence, en particulier de l’ataxie spinocérébelleuse liée aux expansions polyglutaminiques. Dans des modèles cellulaires humains, ATXN1 constitue un nœud expérimental accessible pour disséquer les circuits de régulation génique, les mécanismes de protéostasie et la vulnérabilité spécifique à certains types cellulaires.

Ataxin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ATXN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ataxin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ATXN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ATXN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ataxin-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ATXN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ataxin-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ataxin-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ATXN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.