Plasmide Double Nickase (h) ARHGAP29: sc-407394-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ARHGAP29 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ARHGAP29 Double Nickase (h) et le plasmide ARHGAP29 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ARHGAP29. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ARHGAP29 Antibody (D-3): sc-365554
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ARHGAP29 | sc-407394-NIC | 20 µg | $410.00 |
ARHGAP29 code une protéine activatrice de l’activité GTPasique (GAP) de la famille Rho, qui régule négativement la signalisation de RhoA en accélérant l’hydrolyse du GTP, modulant ainsi le remodelage du cytosquelette d’actine, la polarité cellulaire et la dynamique des jonctions. En contrôlant la contractilité dépendante de RhoA/ROCK, ARHGAP29 contribue à la morphogenèse épithéliale, à la migration cellulaire et à l’intégrité tissulaire. Des études génétiques et fonctionnelles relient ARHGAP29 au développement cranio-facial, avec des variants associés aux fentes labiales et/ou palatines non syndromiques, et une pertinence plus large pour les voies qui gouvernent l’adhésion et la tension du cytosquelette. Son activité en fait une cible utile pour analyser les circuits des GTPases de la famille Rho et les phénotypes liés à la mécanotransduction dans des modèles cellulaires humains.
ARHGAP29 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ARHGAP29 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ARHGAP29. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ARHGAP29. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ARHGAP29.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.