Arginase 2/ARG2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400639-ACT

O ARG2 humano codifica a arginase 2, uma metaloenzima mitocondrial que hidrolisa a L-arginina em L-ornitina e ureia, modulando a disponibilidade celular de arginina e a biossíntese subsequente de poliaminas e prolina. Ao competir com as sintases de óxido nítrico pela L-arginina, o ARG2 influencia a sinalização por óxido nítrico, o equilíbrio redox e a polarização inflamatória em compartimentos imunes e estromais. A atividade do ARG2 se interconecta com o processamento de nitrogênio relacionado ao ciclo da ureia, o metabolismo mitocondrial e redes de transporte de aminoácidos que regulam a proliferação e respostas ao estresse. A expressão desregulada de ARG2 tem sido associada a alterações no imunometabolismo, disfunção vascular e remodelação do microambiente tumoral, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos de vias dependentes de arginina.

Arginase 2/ARG2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ARG2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Arginase 2/ARG2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ARG2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ARG2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Arginase 2/ARG2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ARG2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Arginase 2/ARG2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Arginase 2/ARG2 em células tumorais com expressão de ARG2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.