ARF3 Double Nickase Plasmid (h): sc-402706-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ARF3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ARF3 Double-Nickase-Plasmid (h) und ARF3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ARF3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ARF3: sc-135841
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ARF3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402706-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ARF3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402706-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADP-Ribosylierungsfaktor 3 (ARF3) ist eine kleine GTPase aus der ARF-Familie, die den vesikulären Transport reguliert, indem sie die Rekrutierung von Hüllproteinen, die Membrankrümmung und den Phospholipidstoffwechsel am Golgi-Apparat und im endosomalen System steuert. Durch den Wechsel zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen ist ARF3 mit sekretorischem und endozytotischem Transport verknüpft, einschließlich COPI-vermitteltem retrogradem Transport und der Koordination der Cargosortierung. Über seine Funktionen in der Membrandynamik und Signalübertragung an intrazellulären Membranen beeinflusst ARF3 Prozesse wie Rezeptor-Recycling, Proteinsekretion und die Organisation des Zytoskeletts. Fehlregulierte Signalwege und Transportprozesse der ARF-Familie wurden mit veränderter Zellmigration, Proliferation und Stressantworten in Verbindung gebracht, was ARF3 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zu transportbezogenen Phänotypen in krankheitsrelevanten Modellen macht.
ARF3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ARF3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ARF3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ARF3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ARF3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.