Aquaporin 7/AQP7 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402564-ACT

AQP7 kodiert Aquaporin 7, einen Aquaglyceroporinkanals in der Membran, der den bidirektionalen Transport von Wasser und kleinen neutralen gelösten Stoffen, insbesondere Glycerol, über die Plasmamembran erleichtert. In Adipozyten und metabolisch aktiven Geweben trägt der durch AQP7 vermittelte Glycerol-Export zum Triglyceridumsatz bei und verknüpft die Lipolyse mit der systemischen Glycerolverwertung, wodurch die zelluläre Energiehomöostase beeinflusst wird. Die Regulation von AQP7 wirkt sich auf das osmotische Gleichgewicht, die Membranpermeabilität und die Verfügbarkeit metabolischer Substrate aus und steht an der Schnittstelle von Lipidstoffwechsel und gluconeogenem Substratfluss. Eine veränderte AQP7-Expression oder -Funktion wurde im Zusammenhang mit Funktionsstörungen des Fettgewebes, mit Insulinresistenz assoziierten metabolischen Phänotypen sowie einer gewebespezifischen Glycerolhandhabung untersucht, die für die kardiometabolische Forschung relevant ist.

Aquaporin 7/AQP7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen AQP7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Aquaporin 7/AQP7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des AQP7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der AQP7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Aquaporin 7/AQP7-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native AQP7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Aquaporin 7/AQP7-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Aquaporin 7/AQP7-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem AQP7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.