Plasmide CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 5/AQP5 (h): sc-400567

Présentation

AQP5 code l’aquaporine 5, un canal hydrique membranaire qui facilite un transport rapide et sélectif de l’eau à travers la membrane plasmique dans les tissus épithéliaux. Dans les épithéliums sécrétoires des voies aériennes, des glandes salivaires et lacrymales, ainsi que des alvéoles pulmonaires, AQP5 contribue à l’homéostasie hydrique et participe à l’hydratation des muqueuses et à la physiologie de la barrière en régulant les mouvements d’eau transépithéliaux. Son activité s’intègre aux réponses au stress osmotique, au transport ionique épithélial et à l’organisation des jonctions, qui, ensemble, façonnent le liquide de surface des voies aériennes et la sécrétion glandulaire. Une expression ou une localisation dérégulée d’AQP5 a été associée à une dysfonction épithéliale dans des affections inflammatoires des voies aériennes, à une hypofonction des glandes salivaires et à une altération de la gestion de l’eau dans la physiopathologie pulmonaire, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la sécrétion et du remodelage épithélial.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 5/AQP5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène AQP5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du AQP5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert AQP5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Aquaporin 5/AQP5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en AQP5 pour l'étude de la signalisation de Aquaporin 5/AQP5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de AQP5 essentiels à la fonction de Aquaporin 5/AQP5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de AQP5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Aquaporin 5/AQP5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Aquaporin 5/AQP5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus AQP5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Aquaporin 5/AQP5 plasmide HDR (h) et le Aquaporin 5/AQP5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie AQP5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles AQP5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.