Aquaporin 2/AQP2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400402

Panoramica

AQP2 codifica l’aquaporina-2, un canale dell’acqua regolato dalla vasopressina che controlla il riassorbimento osmotico di acqua nelle cellule principali del dotto collettore renale. In risposta alla segnalazione AVPR2–cAMP–PKA, AQP2 va incontro a un traffico dipendente dalla fosforilazione verso la membrana apicale, coordinandosi con il riciclo endocitico e la dinamica del citoscheletro per modulare la permeabilità all’acqua della membrana. Questa via integra il controllo ormonale dell’equilibrio dei fluidi con la polarità epiteliale e i processi di trasporto di membrana. La disregolazione dell’espressione, della localizzazione o del gating di AQP2 è associata a una ridotta capacità di concentrare le urine e rappresenta un nodo meccanicistico negli studi sull’omeostasi dell’acqua e sulla disfunzione tubulare renale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 2/AQP2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene AQP2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del AQP2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto AQP2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Aquaporin 2/AQP2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di AQP2 per lo studio della segnalazione di Aquaporin 2/AQP2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni AQP2 critici per la funzione di Aquaporin 2/AQP2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di AQP2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Aquaporin 2/AQP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Aquaporin 2/AQP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus AQP2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Aquaporin 2/AQP2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Aquaporin 2/AQP2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia AQP2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio AQP2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.