Aquaporin 2/AQP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400402

Übersicht

AQP2 kodiert Aquaporin-2, einen durch Vasopressin regulierten Wasserkanal, der die osmotische Wasserrückresorption in den Hauptzellen der renalen Sammelrohre steuert. Als Antwort auf die AVPR2–cAMP–PKA-Signalgebung durchläuft AQP2 eine phosphorylierungsabhängige Translokation zur apikalen Membran und koordiniert dabei endozytotisches Recycling und Zytoskelettdynamik, um die Wasserpermeabilität der Membran fein abzustimmen. Dieser Signalweg verknüpft die hormonelle Kontrolle des Flüssigkeitshaushalts mit epithelialer Polarität und membranständigen Transportprozessen. Eine Fehlregulation von AQP2-Expression, -Lokalisation oder -Gating ist mit einer verminderten Fähigkeit zur Urinkonzentrierung verbunden und stellt einen mechanistischen Knotenpunkt in Studien zur Wasserhomöostase und tubulären Nierenfunktionsstörung dar.

Das Aquaporin 2/AQP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des AQP2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des AQP2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von AQP2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Aquaporin 2/AQP2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von AQP2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Aquaporin 2/AQP2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf AQP2-Exone abzielen, die für die Aquaporin 2/AQP2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere AQP2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Aquaporin 2/AQP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Aquaporin 2/AQP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des AQP2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Aquaporin 2/AQP2 HDR-Plasmid (h) und Aquaporin 2/AQP2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von AQP2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten AQP2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.