APLP1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403937-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das APLP1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- APLP1 Double-Nickase-Plasmid (h) und APLP1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf APLP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
APLP1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403937-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
APLP1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403937-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
APLP1 (amyloid-beta-Vorläuferprotein-ähnliches Protein 1) ist ein neuronales Typ-I-Transmembran-Glykoprotein der APP-Familie, das an der Organisation von Synapsen, dem Neuritenauswuchs und aktivitätsabhängiger Signalübertragung beteiligt ist. Es unterliegt einer regulierten proteolytischen Verarbeitung und trägt zu Zell-Zell-Adhäsion sowie zu Prozessen des vesikulären Transports bei, die die neuronale Konnektivität prägen. Die Funktion von APLP1 überschneidet sich mit Signalwegen, die synaptische Reifung, endosomale Sortierung und den Turnover von Membranproteinen steuern, und verknüpft es damit mit Mechanismen, die amyloidogene Verarbeitungsnetzwerke im Nervensystem beeinflussen. Veränderungen in der Biologie der APP-Familie und der Proteostase wurden mit phänotypischen Merkmalen in Verbindung gebracht, die für neurodegenerative Erkrankungen relevant sind, wodurch APLP1 ein nützliches Ziel zur Untersuchung neuronaler Homöostase und synaptischer Dysfunktion darstellt.
APLP1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des APLP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von APLP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die APLP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit APLP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.