Plasmide Double Nickase (h) APG5/ATG5: sc-416847-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) APG5/ATG5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide APG5/ATG5 Double Nickase (h) et le plasmide APG5/ATG5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ATG5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: APG5/ATG5 Antibody (C-1): sc-133158
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) APG5/ATG5 | sc-416847-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) APG5/ATG5 | sc-416847-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATG5 (APG5) est un facteur essentiel de l’autophagie : il se conjugue à ATG12 et s’associe à ATG16L1 pour former un complexe central requis pour l’élongation de la membrane de l’autophagosome et la lipidation de LC3. Par ces fonctions, ATG5 soutient la macroautophagie basale et induite par le stress, la mitophagie, ainsi que l’élimination des agrégats protéiques et des organites endommagés, en intégrant des voies de détection des nutriments telles que mTOR et AMPK au renouvellement lysosomal. Une activité d’ATG5 altérée a été associée à une protéostasie dérégulée, à l’inflammation et à une susceptibilité à des phénotypes neurodégénératifs, métaboliques, infectieux et liés au cancer, ce qui en fait une cible fréquente dans les études sur la survie cellulaire et la signalisation immunitaire. Dans les cellules humaines, la perturbation d’ATG5 est couramment utilisée pour distinguer les mécanismes dépendants de l’autophagie de ceux indépendants de l’autophagie dans les réponses au stress et le contrôle qualité intracellulaire.
APG5/ATG5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATG5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATG5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATG5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATG5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.