Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ape2 (h): sc-407307

Présentation

L’APEX2 humain code l’endonucléase apurinique/apyrimidinique 2 (Ape2), une nucléase qui reconnaît les sites abasiques et participe à la réparation par excision de base de l’ADN ainsi qu’au maintien de l’intégrité du génome. Ape2 contribue au traitement des extrémités d’ADN endommagées et soutient les réponses cellulaires aux lésions oxydatives et à celles associées à la réplication, reliant ainsi son activité à la gestion du stress réplicatif et à la signalisation des points de contrôle. En influençant l’accumulation et la résolution des dommages à l’ADN, la fonction d’APEX2 est pertinente pour les mécanismes à l’origine de la mutagénèse et de l’instabilité chromosomique observées dans le cancer et d’autres troubles associés à une capacité réduite de réparation de l’ADN. Par conséquent, APEX2 est fréquemment étudié dans des contextes tels que les interactions entre voies de réponse aux dommages de l’ADN, la biologie du stress oxydatif et le choix des voies de réparation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ape2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène APEX2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du APEX2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert APEX2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ape2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en APEX2 pour l'étude de la signalisation de Ape2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de APEX2 essentiels à la fonction de Ape2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de APEX2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ape2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Ape2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus APEX2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ape2 plasmide HDR (h) et le Ape2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie APEX2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles APEX2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.