APC8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406761

Visão geral

CDC23 codifica a APC8, uma subunidade central do complexo promotor da anáfase/ciclossomo (APC/C), uma ligase E3 de ubiquitina que coordena a progressão mitótica e a saída do ciclo celular ao direcionar reguladores-chave, como securina e ciclinas, para degradação pelo proteassoma. A APC8 contribui para a montagem do APC/C e para o reconhecimento de substratos, integrando sinais de checkpoints para assegurar a separação correta das cromátides-irmãs e a manutenção da estabilidade genômica. Por meio de seu papel na proteólise mediada por ubiquitina, CDC23 se conecta a vias que controlam o checkpoint do fuso, o timing mitótico e as transições ordenadas por G2/M e pela anáfase. A desregulação de componentes do APC/C e dos mecanismos associados de controle do ciclo celular é frequentemente implicada em distúrbios proliferativos e fenótipos relacionados à aneuploidia, tornando CDC23/APC8 um alvo relevante para estudos mecanísticos de defeitos na divisão celular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO APC8 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CDC23 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CDC23, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CDC23 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína APC8.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CDC23 para a investigação da sinalização de APC8, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CDC23 críticos para a função APC8
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CDC23 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo APC8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo APC8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CDC23. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo APC8 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR APC8 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CDC23 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CDC23 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.