Particules Lentivirales d'Activation (h) ANO2: sc-404198-LAC

Le gène humain **ANO2** code l’anoctamine 2 (TMEM16B), un canal chlore activé par le calcium qui régule l’excitabilité membranaire et le flux de chlorure en réponse aux signaux intracellulaires de Ca²⁺. L’activité d’ANO2 contribue à la transduction de signal dépendante du Ca²⁺, en modulant la fréquence de décharge des potentiels d’action, le traitement des signaux sensoriels et la dynamique de sécrétion dans des types cellulaires spécialisés. En modulant l’homéostasie ionique et les propriétés électriques, ANO2 s’inscrit à l’interface de voies qui gouvernent la signalisation neuronale et le transport épithélial. Une dysfonction des canaux chlore a été associée à des phénotypes d’excitabilité altérés et présente un intérêt pour les études de physiologie sensorielle et des mécanismes liés aux canalopathies.

Les particules d'activation lentivirales ANO2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ANO2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ANO2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ANO2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ANO2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ANO2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.