ANO10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417456

Übersicht

ANO10 (Anoctamin 10/TMEM16K) ist ein im endoplasmatischen Retikulum (ER) lokalisiertes Mitglied der TMEM16-Familie, das mit dem Scrambling von Phospholipiden und Ca2+-regulierter Membrandynamik in Verbindung gebracht wird. Es trägt zur ER-Homöostase, zur Lipidverteilung und zu nachgeschalteten Prozessen bei, darunter Vesikeltransport, die Funktion von Organellen-Kontaktstellen und Signalwege der Stressantwort. Eine genetische Störung von ANO10 ist mit autosomal-rezessiver spinozerebellärer Ataxie und verwandten neurodegenerativen Phänotypen assoziiert, was Rollen bei der neuronalen Erhaltung und der Regulation von Membranlipiden nahelegt. ANO10 wird daher in zellulären Modellen der Neurobiologie, des ER-Stresses und der lipidvermittelten Signalgebung untersucht.

Das ANO10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ANO10-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ANO10-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ANO10 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ANO10-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ANO10-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ANO10-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ANO10-Exone abzielen, die für die ANO10-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ANO10-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ANO10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ANO10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ANO10-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ANO10 HDR-Plasmid (h) und ANO10 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ANO10-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ANO10-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.