ANKH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419107
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- ANKH El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico ANKH, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
ANKH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419107 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen **Ank** de ratón codifica **ANKH**, una proteína de membrana multipaso que regula el transporte de pirofosfato inorgánico (PPi) a través de la membrana plasmática y ayuda a mantener la homeostasis del PPi extracelular. Al modular el equilibrio PPi/fosfato, ANKH influye en la biomineralización, el depósito mineral en la matriz y procesos asociados a osteo/condrocitos vinculados al desarrollo esquelético y a la calcificación tisular. La función de ANKH se solapa con vías que controlan el metabolismo mineral y la remodelación de la matriz extracelular, lo que la hace relevante para estudios de calcificación aberrante y de fenotipos articulares u óseos. Por ello, la alteración de **Ank** se utiliza para investigar mecanismos que acoplan el manejo del PPi con la diferenciación celular y los resultados de depósito mineral *in vivo* y en células de ratón cultivadas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO ANKH (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ank en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ank junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ank tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ANKH.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ank para la investigación de la señalización de ANKH, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Ank críticos para la función de ANKH
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ank para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido ANKH CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ANKH CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ank. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ANKH (m) y el plásmido HDR ANKH (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ank para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ank definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.