ANG I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401766

Übersicht

Angiogenin (ANG), auch als ANG I bezeichnet, ist ein sezerniertes Mitglied der RNase-A-Superfamilie, das die angiogene Signalübertragung und die stressadaptive RNA-Metabolisierung reguliert. ANG kann in den Zellkern translozieren und die rRNA-Transkription fördern, wodurch Ribosomenbiogenese und proliferative Kapazität unterstützt werden; zudem spaltet es tRNAs, um stressinduzierte Fragmente zu erzeugen, die die Translation modulieren. Über diese Aktivitäten verknüpft ANG extrazelluläre Signale mit RNA-Verarbeitungsprogrammen, die das Verhalten von Endothelzellen, Entzündungsprozesse und das zelluläre Überleben unter Stress beeinflussen. Eine dysregulierte ANG-Expression oder -Aktivität wurde mit pathologischem vaskulärem Remodeling und neurodegenerativen Phänotypen in Verbindung gebracht, was ANG zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zu Angiogenese und RNA-Stresswegen macht.

Das ANG I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ANG-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ANG-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ANG nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ANG I-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ANG-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ANG I-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ANG-Exone abzielen, die für die ANG I-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ANG-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ANG I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ANG I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ANG-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ANG I HDR-Plasmid (h) und ANG I HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ANG-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ANG-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.