Androgen Receptor CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400026-ACT

ARはヒトのアンドロゲン受容体をコードしており、リガンド（アンドロゲン）によって活性化される核内ホルモン受容体である。ARはアンドロゲンに結合すると核へ移行し、アンドロゲン応答配列（ARE）を介して転写を制御する。アンドロゲン受容体シグナルは、共役因子（コレギュレーター）との相互作用や、PI3K/AKT、MAPK、WNT経路とのクロストークを通じて、細胞周期の進行、分化プログラム、代謝、クロマチンリモデリングを統合的に調整する。AR活性の破綻は内分泌に駆動される生物学と関連し、ホルモン応答性がん、球脊髄性筋萎縮症などの神経筋表現型、ならびにステロイド代謝異常で頻繁に研究されている。転写のハブとして、ARはエンハンサー利用、エピジェネティック状態、刺激依存的な遺伝子ネットワークを解析するための扱いやすい指標を提供する。

Androgen Receptor CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ARの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Androgen Receptor CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Androgen Receptorの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAndrogen Receptor依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAndrogen Receptor経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。