AMID/AIFM2/FSP1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-427933-NIC

マウスAifm2は、細胞内のレドックス制御およびストレス応答に関与するフラボタンパク質オキシドレダクターゼであるAMID/AIFM2/FSP1をコードする。FSP1はNAD(P)H依存性のオキシドレダクターゼとして機能し、膜上でのCoQ10再生を支えることで脂質過酸化の抑制に寄与し、フェロトーシス感受性の制御に関与する。AMIDはミトコンドリアおよび核のストレスシグナル伝達とも関連づけられており、状況に応じてアポトーシス関連経路における役割が報告されている。AIFM2/FSP1に関連するレドックスおよび細胞死プログラムの制御異常は、酸化傷害、神経変性、虚血再灌流の生物学、ならびにがん細胞の生存機構の研究において重要である。

AMID/AIFM2/FSP1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Aifm2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Aifm2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Aifm2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Aifm2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。