alpha-L-iduronidase Double Nickase Plasmid (h): sc-403722-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das alpha-L-iduronidase Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- alpha-L-iduronidase Double-Nickase-Plasmid (h) und alpha-L-iduronidase Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf IDUA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
alpha-L-iduronidase Double Nickase Plasmid (h) | sc-403722-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
alpha-L-iduronidase Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403722-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane IDUA-Gen kodiert die lysosomale Hydrolase alpha-L-Iduronidase, ein Schlüsselenzym im Abbau von Glykosaminoglykanen, das terminale Iduronsäurereste von Dermatansulfat und Heparansulfat abspaltet. Eine intakte IDUA-Aktivität unterstützt den lysosomenabhängigen Umsatz, den endo-lysosomalen Transport und die zelluläre Proteostase, indem sie die Anhäufung nicht abgebauter Polysaccharide verhindert. Störungen dieses Signalwegs stehen mit lysosomaler Speicherpathologie sowie nachgeschalteten Effekten auf das Remodeling der extrazellulären Matrix und inflammatorische Signalwege in Zusammenhang. IDUA wird daher häufig als funktioneller Readout für die Lysosomenbiologie, den Substratfluss und Genotyp-Phänotyp-Beziehungen in menschlichen Zellmodellen verwendet.
alpha-L-iduronidase Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IDUA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IDUA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IDUA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IDUA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.