alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-416366

Übersicht

ATP1A3 kodiert die katalytische Alpha-3-Untereinheit der Na⁺/K⁺-transportierenden ATPase, einer P-Typ-ATPase der Plasmamembran, die durch ATP-Hydrolyse transmembrane Na⁺- und K⁺-Gradienten aufrechterhält. Durch die Beeinflussung des Ruhe-Membranpotenzials, der Erholung nach Aktionspotenzialen und des sekundären Transports wirkt ATP1A3 auf die neuronale Erregbarkeit, die Ionenhomöostase und die Energiekopplung in erregbaren Geweben. Seine Aktivität ist in Prozesse wie synaptische Transmission, Calciumhandhabung und zelluläre Stressantworten eingebunden, die von elektrochemischen Gradienten abhängen. Genetische und funktionelle Störungen von ATP1A3 sind mit neurologischen Krankheitsphänotypen verknüpft und machen es zu einem nützlichen Ansatzpunkt, um Mechanismen der Neurophysiologie und der Ionen-Transportdysfunktion zu untersuchen.

Das alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ATP1A3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ATP1A3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ATP1A3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ATP1A3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ATP1A3-Exone abzielen, die für die alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ATP1A3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ATP1A3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3 HDR-Plasmid (h) und alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ATP1A3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ATP1A3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.