ALK-1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400728-LAC

ACVRL1 kodiert die Activin-Rezeptor‑ähnliche Kinase 1 (ALK‑1), einen Serin/Threonin‑Kinase‑Rezeptor vom Typ I aus der TGF‑β/BMP‑Superfamilie, der in Endothelzellen besonders stark aktiv ist. Nach Ligandenbindung von BMP9 oder BMP10 zusammen mit Typ‑II‑Rezeptoren leitet ALK‑1 Signale über SMAD1/5/8 weiter und steuert so Transkriptionsprogramme, die das angiogene Aussprossen, die Gefäßreifung und die endotheliale Quieszenz regulieren. Crosstalk mit ALK5/SMAD2/3 sowie Signale aus VEGF‑ und Notch‑Signalwegen helfen dabei, während des vaskulären Remodelings proliferationsfördernde gegenüber stabilisierenden Impulsen auszubalancieren. Eine Fehlregulation der ACVRL1‑Signalübertragung ist mit der Biologie vaskulärer Malformationen assoziiert, einschließlich der hereditären hämorrhagischen Teleangiektasie, und macht ACVRL1 zu einem zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung endothelialer Signaldynamiken und Mechanismen der Gefäßhomöostase.

ALK-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ACVRL1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

ALK-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ACVRL1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen ALK-1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ACVRL1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.