ALB/Albumin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400269-ACT

ALBはアルブミンをコードする遺伝子であり、アルブミンは肝細胞で合成される血漿タンパク質の中で最も豊富なものです。アルブミンは血中へ分泌され、膠質浸透圧の維持に寄与するとともに、脂肪酸、ビリルビン、ホルモン、その他多くの低分子の主要な担体として機能します。アルブミンは全身の栄養素・代謝産物の輸送に関与し、システインに基づくチオール緩衝作用を介してレドックスバランスにも影響を与えます。また、細胞外におけるリガンドの利用可能性に寄与し、それが肝臓の代謝シグナル伝達のあり方を左右し得ます。ALBの発現は肝細胞の分化プログラムや肝特異的な転写ネットワークと緊密に連動しているため、肝臓のアイデンティティと機能を示す代表的なマーカーとして広く用いられています。アルブミン量の変動やALB転写の制御異常は肝機能障害としばしば関連し、肝障害、線維化、代謝性疾患の機序を扱う研究において頻繁にモニタリングされています。

ALB/Albumin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ALBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ALB/Albumin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ALB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はALB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ALB/Albuminの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のALB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるALB/Albumin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびALB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるALB/Albumin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。