AHNAK CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402364-ACT

AHNAK kodiert ein riesiges Gerüstprotein, das an der Plasmamembran sowie in zytoskelettalen Kompartimenten lokalisiert ist und dort dabei hilft, Multiproteinkomplexe zu organisieren, die an Zellarchitektur und Signaltransduktion beteiligt sind. AHNAK wurde über Interaktionen mit Annexinen, S100-Proteinen sowie Komponenten von Zellkontakt- und kontraktilen Netzwerken mit der Regulation der Aktindynamik, der Membranreparatur und calciumabhängigen Prozessen in Verbindung gebracht. Durch die Koordination des Umbaus des Zytoskeletts und der Zell‑Zell-/Zell‑Matrix‑Kommunikation beeinflusst AHNAK Migration, Adhäsion und Stressantworten. Eine fehlregulierte AHNAK-Expression wurde in verschiedenen Krankheitskontexten beschrieben, darunter in der Krebsbiologie und beim Gewebeumbau, was AHNAK zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Signalwegen macht, die Membrangerüstbildung mit transkriptionellen und phänotypischen Programmen koppeln.

AHNAK Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen AHNAK-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

AHNAK Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des AHNAK-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der AHNAK-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen AHNAK-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native AHNAK-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von AHNAK-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des AHNAK-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem AHNAK-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.