Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ah Receptor: sc-400297-ACT

AHR (aryl hydrocarbon receptor) code le récepteur Ah, un facteur de transcription bHLH-PAS activé par ligand, qui intègre des signaux environnementaux et endogènes de petites molécules afin de reprogrammer l’expression génique. Après activation, AHR se transloque dans le noyau, se dimérise avec ARNT et se fixe sur des éléments de réponse aux xénobiotiques pour induire des programmes de détoxification, notamment via CYP1A1/1B1, tout en interagissant aussi avec NF-κB, la signalisation de l’hypoxie et le contrôle du cycle cellulaire. La signalisation AHR façonne la biologie des barrières épithéliales, les réponses au stress oxydatif et la différenciation immunitaire, influençant des voies pertinentes pour l’inflammation et la biologie tumorale. Une activité AHR dérégulée a été associée à une altération du métabolisme des xénobiotiques, à un déséquilibre immunitaire et à des effets dépendants du contexte sur la prolifération et la migration.

Ah Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AHR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ah Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AHR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AHR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ah Receptor. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AHR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ah Receptor au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ah Receptor dans les cellules tumorales présentant une expression de AHR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.