AGR2CRISPR激活质粒(h): sc-403036-ACT

前梯度蛋白2（AGR2）是人类内质网中的一种类似蛋白二硫键异构酶的因子，可通过与内质网伴侣蛋白网络相互作用，支持分泌蛋白折叠并维持蛋白稳态（proteostasis）。AGR2参与调控上皮分化、黏蛋白生成以及内质网稳态的维持，使其活性与未折叠蛋白反应（UPR）信号及依赖氧化还原的质量控制过程相联系。AGR2表达异常与上皮性肿瘤生物学相关，包括细胞黏附、迁移和分泌表型的改变，因此它是研究癌症相关模型中应激适应与分化程序的一个有价值节点。这些功能也使AGR2成为研究内质网应激、蛋白转运以及上皮谱系状态时的机制性读出指标。

AGR2 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性AGR2的表达。

AGR2 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的AGR2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于AGR2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性AGR2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的AGR2位点，并能够研究内源性位点上依赖于AGR2的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在AGR2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟AGR2通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。