Plásmido Doble Nickase (h) AFP/Alpha fetoprotein: sc-400355-NIC

AFP codifica la alfa-fetoproteína, una glucoproteína secretada que se expresa en niveles elevados durante el desarrollo fetal y que, por lo general, queda silenciada tras el nacimiento en la mayoría de los tejidos. AFP está vinculada a programas de diferenciación de hepatocitos y al cambio transcripcional de fetal a adulto, y su reexpresión refleja una regulación génica alterada en contextos hepáticos y de células germinales. En biología del cáncer, AFP se utiliza ampliamente como marcador molecular asociado al carcinoma hepatocelular y a ciertos tumores de células germinales, lo que respalda estudios sobre el estado de las células tumorales, la identidad de linaje y las redes transcripcionales oncogénicas. Como antígeno circulante y asociado a tumores, AFP también sirve como lectura para investigar la dinámica de la vía secretora y los cambios relacionados con estrés en la producción de proteínas.

AFP/Alpha fetoprotein El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AFP en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AFP. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AFP. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AFP alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.