AFP/Alpha fetoprotein CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400355

Übersicht

AFP (Alpha-Fetoprotein) kodiert ein sezerniertes onkofetales Glykoprotein, das während der fetalen Entwicklung stark exprimiert wird und nach der Geburt weitgehend zum Schweigen kommt, wo es zur Regulation von Wachstums- und Differenzierungsprogrammen beiträgt. In adulten Geweben ist eine erneute Expression von AFP häufig mit veränderten hepatischen Linienstadien sowie mit einem Umbau extrazellulärer und immunologischer Signalwege in der Tumormikroumgebung assoziiert. Die AFP-Expression wird als molekulares Merkmal in Studien zur Biologie des hepatozellulären Karzinoms und von Keimzelltumoren genutzt und wird häufig zusammen mit Signalwegen bewertet, die mit Hepatozytendifferenzierung, Proliferation und Stressantworten verknüpft sind. Als zirkulierendes Protein dient AFP zudem als gut handhabbarer Readout für transkriptionelle Regulation und die Dynamik des sekretorischen Weges in humanen Zellmodellen.

Das AFP/Alpha fetoprotein CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des AFP-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des AFP-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von AFP nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AFP/Alpha fetoprotein-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von AFP-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AFP/Alpha fetoprotein-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf AFP-Exone abzielen, die für die AFP/Alpha fetoprotein-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere AFP-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AFP/Alpha fetoprotein CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom AFP/Alpha fetoprotein CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des AFP-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AFP/Alpha fetoprotein HDR-Plasmid (h) und AFP/Alpha fetoprotein HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von AFP-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten AFP-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.