Plásmido CRISPR de Activación (h) Adipsin: sc-401782-ACT

El factor D del complemento (CFD), también conocido como adipsina, es una proteasa de serina secretada que actúa como la enzima limitante de la velocidad de la vía alternativa del complemento al escindir el factor B unido a C3b para generar la convertasa de C3 (C3bBb). Además de la amplificación de la inmunidad innata y la opsonización, la adipsina humana se expresa abundantemente en los adipocitos y vincula el estado metabólico con la señalización inflamatoria dentro de los microambientes del tejido adiposo. La actividad de CFD influye en programas de citocinas dependientes del complemento, el reclutamiento de células inmunitarias y la remodelación tisular local mediante la señalización posterior de las anafilotoxinas C3a/C5a. La activación desregulada del complemento y la expresión alterada de CFD se han asociado con fenotipos inflamatorios y metabólicos, incluida la disfunción del tejido adiposo y contextos más amplios de enfermedades mediadas por el sistema inmunitario.

Adipsin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CFD sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Adipsin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CFD en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CFD, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Adipsin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CFD y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Adipsin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Adipsin en células tumorales con expresión de CFD silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.