Plasmide CRISPR d'Activation (h) AdipoR2: sc-401848-ACT

ADIPOR2 code le récepteur 2 de l’adiponectine (AdipoR2), un récepteur à sept domaines transmembranaires qui assure la transduction de signaux métaboliques dépendants de l’adiponectine dans de multiples tissus. L’activation d’AdipoR2 favorise l’oxydation des acides gras et l’homéostasie du glucose, en partie via des programmes transcriptionnels associés à l’AMPK et à PPARα, et influence les réponses au stress cellulaire ainsi que la signalisation inflammatoire. Des altérations de l’expression ou de la signalisation d’ADIPOR2 ont été associées à l’insulinorésistance, au syndrome métabolique, à la stéatose hépatique non alcoolique et, plus largement, au risque cardiométabolique, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des voies des adipokines.

AdipoR2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ADIPOR2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

AdipoR2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ADIPOR2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ADIPOR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de AdipoR2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ADIPOR2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de AdipoR2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie AdipoR2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ADIPOR2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.