Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2): sc-400407-KO-2

Übersicht

ADCY3 kodiert die Adenylatcyclase 3 (AC3), ein membranassoziiertes Enzym, das ATP in zyklisches AMP (cAMP) umwandelt und damit die Second-Messenger-Signalübertragung nachgeschaltet an verschiedenste G‑Protein‑gekoppelte Rezeptoren prägt. Durch die Regulation intrazellulärer cAMP-Spiegel beeinflusst AC3 PKA‑ und EPAC‑abhängige Signalwege, die Transkriptionsprogramme, die Aktivität von Ionenkanälen und zelluläre metabolische Antworten steuern. AC3 ist insbesondere in sensorischen und neuroendokrinen Kontexten gut untersucht und trägt zur cAMP‑Mikrodomänen-Signalgebung bei, die die Kopplung von Stimulus und Antwort feinjustiert. Genetische und funktionelle Evidenz verknüpft ADCY3‑assoziierte Signalgebung mit metabolischen Phänotypen und neurobehavioralen Merkmalen, wodurch ADCY3 für mechanistische Studien der cAMP‑getriebenen Regulation in menschlichen Zellen relevant ist.

Das Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ADCY3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ADCY3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ADCY3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ADCY3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ADCY3-Exone abzielen, die für die Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ADCY3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ADCY3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 HDR-Plasmid (h) und Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ADCY3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ADCY3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.