Plasmide Double Nickase (h) ADAR1: sc-401611-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ADAR1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ADAR1 Double Nickase (h) et le plasmide ADAR1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ADAR. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ADAR1 Antibody (D-8): sc-271854
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ADAR1 | sc-401611-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ADAR1 | sc-401611-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADAR code pour ADAR1, une adénosine désaminase inductible par l’interféron qui catalyse l’édition ARN A→I au sein de structures d’ARN double brin, remodelant les séquences codantes, l’épissage, la stabilité des ARN et le ciblage par les miARN. En éditant les dsARN endogènes, ADAR1 limite l’activation aberrante de capteurs de l’immunité innée tels que MDA5/MAVS et la signalisation en aval de l’interféron de type I, contribuant à maintenir la discrimination soi/non-soi. ADAR1 influence aussi la maturation des ARN lors des réponses au stress et peut moduler les issues traductionnelles via l’édition d’éléments répétitifs et de transcrits structurés. Une activité d’ADAR1 dérégulée ou un déséquilibre de l’édition de l’ARN a été associé à des interféronopathies, des phénotypes inflammatoires et des interactions tumeur–immunité altérées, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude de la surveillance de l’ARN et de l’homéostasie de l’immunité innée.
ADAR1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ADAR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ADAR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ADAR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ADAR.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.