ADAM9 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403665-ACT

ADAM9 kodiert eine transmembrane Metalloprotease-Disintegrin, die das Shedding der Ektodomäne von Membranproteinen sowie die Umgestaltung der perizellulären Umgebung reguliert. Durch die proteolytische Prozessierung von Vorstufen von Wachstumsfaktoren und Adhäsionsmolekülen beeinflusst ADAM9 Zell‑Zell‑ und Zell‑Matrix‑Interaktionen, Rezeptorsignalgebung und Proteostase und ist in Signalwege eingebunden, die mit EGFR/ERBB‑Signalgebung, integrinvermittelter Adhäsion und Migrationsprogrammen verknüpft sind. Eine dysregulierte ADAM9‑Aktivität und ‑Expression wurde mit invasiven Phänotypen, inflammatorischen Mikroumgebungen und veränderter Gewebeumgestaltung in Verbindung gebracht, was ADAM9 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien der Tumorbiologie und chronischer krankheitsbedingter Remodelling‑Prozesse macht.

ADAM9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ADAM9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ADAM9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ADAM9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ADAM9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ADAM9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ADAM9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ADAM9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ADAM9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ADAM9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.