ADAM19 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-408791-ACT

ADAM19 kodiert eine membranverankerte Metalloprotease-Disintegrin, die das Ektodomänen-Shedding von Zelloberflächenproteinen reguliert und Zell‑Zell‑ sowie Zell‑Matrix‑Interaktionen moduliert. Durch die proteolytische Prozessierung von Signal- und Adhäsionsmolekülen beeinflusst ADAM19 Signalwege, die mit Wachstumsfaktor-Signalisierung, Entzündungsreaktionen und dem Umbau der extrazellulären Matrix verknüpft sind. Seine Aktivität wurde in Zusammenhängen wie Entwicklung, Gewebereparatur und der Regulation immunologischer und stromaler Mikroumgebungen untersucht. Eine dysregulierte ADAM19-Expression oder Proteasefunktion wurde mit pathologischem Remodeling und veränderten Signaldynamiken in mehreren krankheitsrelevanten Modellen in Verbindung gebracht, unter anderem bei kardiovaskulären und onkogenen Prozessen.

ADAM19 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ADAM19-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ADAM19 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ADAM19-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ADAM19-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ADAM19-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ADAM19-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ADAM19-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ADAM19-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ADAM19-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.