Plasmide CRISPR d'Activation (h) ACSVL4: sc-402011-ACT

SLC27A4 code pour ACSVL4 (FATP4), une synthétase d’acyl‑CoA à très longue chaîne qui couple l’absorption des acides gras à longue et très longue chaîne à leur activation intracellulaire, orientant ainsi les lipides vers la β‑oxydation, la biosynthèse de lipides complexes et le remodelage membranaire. En générant des acyl‑CoA d’acides gras, ACSVL4 influence l’homéostasie lipidique épithéliale et les processus associés à la barrière, et s’inscrit dans des programmes métaboliques qui régulent les réponses au stress cellulaire et la différenciation. Une activité dérégulée de SLC27A4 a été associée à des défauts de traitement des lipides épidermiques et à une prise en charge altérée des acides gras, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie cutanée, du métabolisme lipidique et de la reprogrammation métabolique dans des contextes liés aux maladies.

ACSVL4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC27A4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ACSVL4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC27A4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC27A4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ACSVL4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC27A4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ACSVL4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ACSVL4 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC27A4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.