Acrosin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402292

Descripción general

ACR codifica la acrosina, una proteasa de serina sintetizada como el cimógeno proacrosina y almacenada en el acrosoma de los espermatozoides humanos. Tras la capacitación y la reacción acrosómica, la acrosina participa en proteólisis regulada y en la unión a sustratos que favorecen la interacción del espermatozoide con la zona pelúcida y el avance a través de matrices extracelulares durante la fecundación. Su actividad se relaciona con la exocitosis acrosómica, las cascadas de activación de proteasas y la remodelación de proteínas de la superficie espermática durante el reconocimiento de gametos. La expresión alterada de ACR o la función de la acrosina se estudian en el contexto de la biología reproductiva masculina y de fenotipos asociados a la infertilidad, incluidos la unión espermatozoide–zona deficiente y la reducción de la competencia fecundante.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Acrosin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ACR en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ACR junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ACR tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Acrosin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ACR para la investigación de la señalización de Acrosin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ACR críticos para la función de Acrosin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ACR para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Acrosin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Acrosin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ACR. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Acrosin (h) y el plásmido HDR Acrosin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ACR para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ACR definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.