Plásmido Doble Nickase (h) ACOT8: sc-407262-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ACOT8 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ACOT8 (h) y el plásmido de doble nickasa ACOT8 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ACOT8. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ACOT8 Anticuerpo (C-3): sc-7343
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ACOT8 | sc-407262-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ACOT8 | sc-407262-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACOT8 codifica la acil‑CoA tioesterasa 8, una enzima peroxisomal que hidroliza tioésteres de acil‑CoA de ácidos grasos para generar ácidos grasos libres y coenzima A, ayudando a regular la disponibilidad de CoA intraperoxisomal y el tamaño del pool de acil‑CoA. Al modular el flujo de sustratos a través de la β‑oxidación peroxisomal y la remodelación lipídica, ACOT8 contribuye a la homeostasis lipídica celular y al equilibrio redox. Su actividad se integra con procesos más amplios asociados al peroxisoma, incluido el manejo de ácidos grasos de cadena muy larga y la coordinación con la oxidación de ácidos grasos mitocondrial. La desregulación de las vías del metabolismo lipídico peroxisomal en las que participa ACOT8 se ha investigado en el contexto de fenotipos metabólicos e inflamatorios en los que son relevantes la utilización alterada de ácidos grasos y el estrés oxidativo.
ACOT8 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ACOT8 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ACOT8. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ACOT8. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ACOT8 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.