ACLP/AEBP1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-419033-ACT

Aebp1 kodiert ACLP/AEBP1, ein mit der extrazellulären Matrix assoziiertes Protein, das an der Organisation von Kollagen, der Aktivierung von Fibroblasten und der Modulation von Programmen des Gewebeumbaus beteiligt ist. In Maus-Zellen wurde ACLP/AEBP1 mit der Regulation stromaler Signalnetzwerke in Verbindung gebracht, darunter Signalwege, die Entzündungsreaktionen und TGF-β-assoziierte fibrotische Prozesse beeinflussen. Eine veränderte Aebp1-Expression wird häufig im Kontext der Ablagerung extrazellulärer Matrix, der Gefäß- und Fettgewebsbiologie sowie der Differenzierung mesenchymaler Zellen untersucht. Diese Funktionen machen Aebp1 zu einem nützlichen Ziel, um in biomedizinischen Forschungsmodellen die mikroumgebungsabhängige Regulation des Zellverhaltens und krankheitsrelevante Umbau-Phänotypen zu untersuchen.

ACLP/AEBP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Aebp1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ACLP/AEBP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Aebp1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Aebp1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ACLP/AEBP1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Aebp1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ACLP/AEBP1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ACLP/AEBP1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Aebp1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.