AChE Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401091

Visão geral

O gene humano **ACHE** codifica a acetilcolinesterase (AChE), uma hidrolase de serina que termina a neurotransmissão colinérgica ao hidrolisar rapidamente a acetilcolina nas sinapses e nas junções neuromusculares. Para além da sinalização sináptica canónica, a atividade da AChE influencia o acoplamento excitação–contração, a regulação autonómica e a sinalização colinérgica anti-inflamatória, por meio da modulação da disponibilidade de acetilcolina. A expressão de **ACHE** e a desregulação enzimática têm sido associadas a alterações na função de redes neuronais, a vias ligadas ao stress e à neuroinflamação e à suscetibilidade a fenótipos neuromusculares e neurodegenerativos. Como enzima ancorada à membrana e também solúvel, com isoformas específicas de tecido, **ACHE** é frequentemente estudado em modelos de fisiologia sináptica, resposta a tóxicos e crosstalk da sinalização colinérgica.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO AChE (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ACHE em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ACHE, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ACHE na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína AChE.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ACHE para a investigação da sinalização de AChE, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ACHE críticos para a função AChE
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ACHE para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo AChE Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo AChE Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ACHE. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo AChE Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR AChE (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ACHE para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ACHE definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.