ACE2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401131-ACT

Angiotensin-konvertierendes Enzym 2 (ACE2) ist eine humane Typ-I-Membran-Metalloprotease, die die klassische Signalübertragung des Renin–Angiotensin-Systems ausgleicht, indem sie Angiotensin II in Angiotensin-(1–7) umwandelt und damit die Signalweiterleitung in Richtung MAS-Rezeptor-gekoppelter Signalwege verschiebt. Über die Regulation vasoaktiver Peptide beeinflusst ACE2 die endotheliale Homöostase, inflammatorische Signalwege, Reaktionen auf oxidativen Stress sowie Gewebeumbauprozesse im kardiovaskulären, renalen und pulmonalen System. ACE2 dient außerdem als Zelloberflächen-Eintrittsfaktor für bestimmte Coronaviren, wodurch seine Expressionsniveaus mit Studien zu Wirt–Pathogen-Interaktionen und zur Biologie epithelialer Barrieren verknüpft sind. Eine dysregulierte ACE2-Aktivität oder -Expression wird häufig in Modellen für Hypertonie, Herz-Kreislauf-Erkrankungen, akute und chronische Lungenschädigung, Nierenerkrankungen und metabolisch getriebene Entzündung untersucht.

ACE2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ACE2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ACE2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ACE2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ACE2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ACE2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ACE2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ACE2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ACE2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ACE2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.