ACADVL (VLCAD) Double Nickaseプラスミド (h): sc-403111-NIC

ACADVLは、超長鎖アシルCoA脱水素酵素（VLCAD）をコードする。VLCADはミトコンドリア内膜に関連するフラボタンパク質であり、長鎖脂肪酸アシルCoAのβ酸化における最初の脱水素反応段階を触媒する。ミトコンドリア脂肪酸酸化を開始することで、VLCADは絶食時や高エネルギー需要状態におけるエネルギー恒常性を支え、さらにTCA回路および酸化的リン酸化との下流の代謝統合に向けたアセチルCoA産生にも寄与する。ACADVLの機能は、脂質分解、ミトコンドリアのレドックスバランス、ならびに栄養可用性に対する細胞応答と密接に関連している。ACADVLの破綻は長鎖脂肪酸酸化の先天性（遺伝性）障害と関連しており、ヒト細胞における代謝ストレス表現型やミトコンドリア機能不全の機序を研究する上で重要な遺伝子座である。

ACADVL ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ACADVL 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ACADVL内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ACADVLの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ACADVLが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。