ABR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430977

Descripción general

Abr codifica ABR, una proteína activadora de la actividad GTPasa (RhoGAP) de la familia Rho que atenúa la señalización mediada por pequeñas GTPasas como Rac y Cdc42, configurando así la remodelación del citoesqueleto, la adhesión celular y la migración. En células de ratón, ABR contribuye a la regulación de la dinámica de actina y de vías downstream vinculadas al tráfico de células inmunitarias y a las respuestas inflamatorias. Mediante su control negativo de las cascadas de señalización impulsadas por GTPasas, ABR influye en procesos como la endocitosis, la polaridad celular y la señalización sensible al estrés. La desregulación de la señalización de las Rho GTPasas es ampliamente relevante para fenotipos que implican motilidad y organización tisular aberrantes, lo que convierte a Abr en un nodo útil para estudios mecanísticos del equilibrio de las redes de señalización.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ABR (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Abr en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Abr junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Abr tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ABR.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Abr para la investigación de la señalización de ABR, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Abr críticos para la función de ABR
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Abr para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ABR CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ABR CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Abr. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ABR (m) y el plásmido HDR ABR (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Abr para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Abr definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.