ABCD1 Double Nickase Plasmid (h): sc-405301-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ABCD1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ABCD1 Double-Nickase-Plasmid (h) und ABCD1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ABCD1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ABCD1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405301-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ABCD1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405301-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABCD1 kodiert einen peroxisomalen ATP-Binding-Cassette(ABC)-Transporter, der sehr langkettige Fettsäure-Acyl-CoAs in Peroxisomen zur β-Oxidation importiert und damit zur Aufrechterhaltung der Lipidhomöostase und der Membranzusammensetzung beiträgt. Über seine Funktion im peroxisomalen Fettsäureabbau steht ABCD1 mit Signal- und Stoffwechselwegen in Verbindung, die das Redoxgleichgewicht, die metabolische Kopplung zwischen Mitochondrien und Peroxisomen sowie entzündliche Signalwege im Zusammenhang mit Lipidakkumulation steuern. Loss-of-Function-Varianten im menschlichen ABCD1 sind mit der X‑chromosomal vererbten Adrenoleukodystrophie assoziiert, bei der eine gestörte peroxisomale VLCFA-Degradation zu erhöhten VLCFA-Spiegeln und nachgelagerten zellulären Stressphänotypen führt. Eine Beeinträchtigung von ABCD1 wird daher häufig genutzt, um peroxisomale Dysfunktion und lipidgetriebene zelluläre Pathologie in relevanten Zelltypen zu modellieren.
ABCD1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ABCD1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ABCD1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ABCD1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ABCD1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.