Plasmide Double Nickase (h) ABCD1: sc-405301-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ABCD1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ABCD1 Double Nickase (h) et le plasmide ABCD1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ABCD1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ABCD1 | sc-405301-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ABCD1 | sc-405301-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABCD1 code un transporteur périsomal de la famille des cassettes de liaison à l’ATP (ABC) qui importe les acyl-CoA d’acides gras à très longue chaîne dans les peroxysomes pour leur β‑oxydation, contribuant ainsi au maintien de l’homéostasie lipidique et de la composition membranaire. Par son rôle dans le catabolisme périsomal des acides gras, ABCD1 s’inscrit à l’interface de voies qui contrôlent l’équilibre rédox, le couplage métabolique mitochondrie–peroxysome et la signalisation inflammatoire liée à l’accumulation lipidique. Des variants perte de fonction d’ABCD1 chez l’humain sont associés à l’adrénoleucodystrophie liée à l’X, dans laquelle l’altération de la dégradation périsomale des AGTLC entraîne une augmentation des AGTLC et des phénotypes de stress cellulaire en aval. La perturbation d’ABCD1 est donc largement utilisée pour modéliser le dysfonctionnement périsomal et la pathologie cellulaire induite par les lipides dans des types cellulaires pertinents.
ABCD1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ABCD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ABCD1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ABCD1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ABCD1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.