Plasmide CRISPR d'Activation (h) ABCA7: sc-403762-ACT

ABCA7 (membre 7 de la sous-famille A des transporteurs à cassette de liaison à l’ATP) est un transporteur lipidique humain impliqué dans l’homéostasie des phospholipides et du cholestérol via un transport transmembranaire dépendant de l’ATP. Il est particulièrement exprimé dans les contextes immunitaires et neuronaux, où il soutient le remodelage membranaire, le trafic endocytaire et l’élimination phagocytaire, reliant la gestion des lipides à la signalisation de l’immunité innée et aux réponses au stress cellulaire. L’activité d’ABCA7 recoupe des voies qui gouvernent la dynamique des vésicules et la composition des radeaux lipidiques, influençant la signalisation des récepteurs et le traitement des antigènes. Des études génétiques et fonctionnelles associent ABCA7 à la susceptibilité aux maladies neurodégénératives et à des modifications du traitement lié à l’amyloïde, ce qui en fait une cible pertinente pour des travaux mécanistiques dans des modèles de type microglie et dans des systèmes neuronaux.

ABCA7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ABCA7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ABCA7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ABCA7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ABCA7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ABCA7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ABCA7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ABCA7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ABCA7 dans les cellules tumorales présentant une expression de ABCA7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.