ABCA5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410568-ACT

ABCA5は、主に細胞内膜に局在し、ATP依存的な脂質の膜間移送に寄与するABCAサブファミリーのATP結合カセット（ABC）トランスポーターをコードします。細胞内のコレステロールおよびスフィンゴ脂質の取り扱いを調節することで、ABCA5はエンドリソソーム輸送、膜組成、ならびにより広範な脂質恒常性経路に影響を与えます。ABCA5の発現変化は、ステロール代謝の破綻や細胞ストレス応答の異常と関連づけられており、遺伝的多型についても、複雑形質や脂質関連の病態生理との関連で検討されてきました。細胞モデルにおいてABCA5は、細胞内脂質輸送がオルガネラ機能や代謝シグナル伝達とどのように結び付くのかを解析するための扱いやすい標的となります。

ABCA5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ABCA5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ABCA5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ABCA5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はABCA5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ABCA5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のABCA5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるABCA5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびABCA5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるABCA5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。