AANAT Double Nickase Plasmid (h): sc-403080-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das AANAT Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- AANAT Double-Nickase-Plasmid (h) und AANAT Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AANAT abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
AANAT Double Nickase Plasmid (h) | sc-403080-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AANAT Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403080-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Die humane AANAT (Arylalkylamin-N-Acetyltransferase) ist das geschwindigkeitsbestimmende Enzym der Melatoninbiosynthese und katalysiert im Tryptophan-/Indolamin-Stoffwechselweg die Acetylierung von Serotonin zu N‑Acetylserotonin. Ihre Aktivität wird streng durch zirkadiane sowie cAMP/PKA-Signale reguliert, einschließlich phosphorylierungsabhängiger Stabilisierung und Interaktionen, die die nächtliche Melatoninproduktion koordinieren. Über die Kontrolle von Melatonin und verwandten Indolamin-Zwischenprodukten trägt AANAT zur zeitlichen Abstimmung von Schlaf–Wach-Rhythmus und neuroendokrinen Prozessen, zu Reaktionen auf oxidativen Stress sowie zur metabolischen Homöostase bei. Veränderte AANAT-Expression oder -Regulation wird im Zusammenhang mit Störungen des zirkadianen Rhythmus und schlafbezogenen Phänotypen sowie in neuropsychiatrischen und metabolischen Forschungskontexten untersucht.
AANAT Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AANAT-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AANAT abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AANAT-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AANAT-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.