Plasmide CRISPR d'Activation (h) 6CKine: sc-403041-ACT

Le gène humain **CCL21** code la chimiokine **6CKine**, un ligand homéostatique de **CCR7** qui guide les cellules dendritiques et les lymphocytes T naïfs vers les organes lymphoïdes secondaires et contribue à l’organisation des tissus lymphoïdes. En établissant des gradients chimiotactiques, CCL21 régule le trafic des leucocytes, le dialogue entre l’endothélium lymphatique et les cellules immunitaires, ainsi que le positionnement des cellules présentatrices d’antigène lors de la surveillance immunitaire. Cet axe s’articule avec la signalisation des GPCR, le remodelage du cytosquelette et les programmes d’adhérence qui façonnent la migration et la compartimentation cellulaires. Une dérégulation de la signalisation CCL21/CCR7 a été associée à des modifications du recrutement des cellules inflammatoires et au remodelage du microenvironnement immunitaire dans des contextes tels que l’inflammation chronique et la lymphangiogenèse associée aux tumeurs, ce qui en fait une cible utile pour des études de mécanistique en immunologie.

6CKine Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CCL21 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

6CKine Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CCL21 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CCL21, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de 6CKine. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CCL21 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de 6CKine au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie 6CKine dans les cellules tumorales présentant une expression de CCL21 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.