5α-Reductase 1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402151-ACT

SRD5A1 kodiert die humane 5α-Reduktase 1, eine NADPH-abhängige mikrosomale Oxidoreduktase, die die Umwandlung von Testosteron in das potentere Androgen Dihydrotestosteron (DHT) katalysiert. Dieser enzymatische Schritt ist zentral für den Stoffwechsel von Steroidhormonen und die Signalübertragung über den Androgenrezeptor und beeinflusst Transkriptionsprogramme, die Proliferation, Differenzierung und die Lipidhomöostase in androgenempfindlichen Geweben regulieren. Die Aktivität von SRD5A1 ist an der endokrinen Regulation beteiligt und wurde mit der Biologie androgengetriebener Erkrankungen in Verbindung gebracht, darunter veränderte steroidogene Stoffflussraten in hormonresponsiven Tumoren sowie dermatologische Krankheitsbilder. Als membranassoziiertes Enzym des endoplasmatischen Retikulums stellt die 5α-Reduktase 1 zudem einen gut untersuchbaren Ansatzpunkt dar, um das Zusammenspiel zwischen Steroidbiosynthese, nukleärer Rezeptorsignalgebung und zellulärem Stoffwechsel zu analysieren.

5α-Reductase 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SRD5A1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

5α-Reductase 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SRD5A1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SRD5A1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen 5α-Reductase 1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SRD5A1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von 5α-Reductase 1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des 5α-Reductase 1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SRD5A1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.