Plasmide Double Nickase (h) 3β-HSD2: sc-400991-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) 3β-HSD2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide 3β-HSD2 Double Nickase (h) et le plasmide 3β-HSD2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HSD3B2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) 3β-HSD2 | sc-400991-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) 3β-HSD2 | sc-400991-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSD3B2 code la 3β‑hydroxystéroïde déshydrogénase humaine de type 2 (3β‑HSD2), une enzyme dépendante du NAD⁺ qui catalyse la conversion oxydative des hydroxystéroïdes Δ5‑3β en cétostéroïdes Δ4, une étape clé de la stéroïdogenèse. Cette activité soutient la biosynthèse surrénalienne et gonadique de la progestérone, de l’androstènedione et d’autres précurseurs apparentés nécessaires aux voies des glucocorticoïdes, des minéralocorticoïdes et des stéroïdes sexuels. La fonction de la 3β‑HSD2 est étroitement liée aux réseaux stéroïdogènes mitochondriaux et du réticulum endoplasmique ainsi qu’à la signalisation de rétrocontrôle endocrinien. Une altération de l’activité ou de l’expression de HSD3B2 a été associée à des erreurs innées de la biosynthèse des stéroïdes et à des phénotypes de déséquilibre stéroïdien, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la biologie surrénalienne et de la reproduction.
3β-HSD2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HSD3B2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HSD3B2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HSD3B2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HSD3B2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.