Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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3β-HSD Double Nickase Plasmid (h): sc-400825-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das 3β-HSD Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- 3β-HSD Double-Nickase-Plasmid (h) und 3β-HSD Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HSD3B1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
3β-HSD Double Nickase Plasmid (h) | sc-400825-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
3β-HSD Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400825-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSD3B1 kodiert die 3β‑Hydroxysteroid‑Dehydrogenase/Δ5‑Δ4‑Isomerase Typ 1 (3β‑HSD), ein mikrosomales Enzym, das zentrale Schritte der Steroidogenese katalysiert, indem es Δ5‑3β‑Hydroxysteroide in ihre Δ4‑Ketosteroid‑Produkte umwandelt, darunter die Umwandlung von Pregnenolon zu Progesteron und von Dehydroepiandrosteron zu Androstendion. Über diese Reaktionen reguliert es den Stofffluss durch die Biosynthesewege von Androgenen, Estrogenen, Glukokortikoiden und Mineralokortikoiden und beeinflusst die Verfügbarkeit zellulärer Steroidhormone. Eine veränderte HSD3B1‑Aktivität oder ‑Expression kann den intrakrinen Steroidstoffwechsel verschieben und wird in Kontexten untersucht, in denen hormonabhängige Signalwege und Differenzierung gestört sind, einschließlich der endokrinen und reproduktiven Biologie sowie hormonresponsiver Krankheitsmodelle.
3β-HSD Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HSD3B1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HSD3B1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HSD3B1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HSD3B1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.