14-3-3 ζ Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400490-LAC

YWHAZ codifica a proteína humana 14-3-3 zeta, um adaptador que se liga a fosfoserina/fosfotreonina e que regula a estabilidade, a localização e a atividade de diversas proteínas parceiras. Por meio de amplas interações proteína–proteína, a 14-3-3 zeta integra a sinalização nas vias PI3K/AKT, MAPK e de resposta ao estresse, influenciando a progressão do ciclo celular, a apoptose e a dinâmica do citoesqueleto. Sua conectividade em rede vincula o YWHAZ à proteostase e ao controle de checkpoints dependentes de fosforilação, tornando-o um foco frequente em estudos de biologia de sistemas sobre reconfiguração de sinalização. A desregulação da expressão da 14-3-3 zeta ou do uso de seus parceiros de ligação tem sido associada a alterações em programas de proliferação e sobrevivência em múltiplos contextos relevantes para doenças, sustentando seu uso como um nó mecanístico em análises de vias.

As Partículas de Ativação Lentivirais 14-3-3 ζ (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de YWHAZ numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais 14-3-3 ζ (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição YWHAZ, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de 14-3-3 ζ. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo YWHAZ e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.